Преимущества и недостатки ПЦР(а) на диагностику туберкулеза

Проведение ПЦР диагностики на туберкулез

В школьные годы всем ставили реакцию Манту для определения туберкулеза. Инфекция передается при бытовом контакте и может жить в тканях человека продолжительное время, а начать прогрессировать всего за несколько месяцев. Кроме людей, переносчиками также являются насекомые и животные. Позднее обнаружение инфекции осложняет лечение, так как бактерии уже адаптировались к лекарственным препаратам. Существует несколько способов диагностики на туберкулез, но наиболее достоверным считается анализ ПЦР.

Что такое туберкулез

В большинстве случаев люди предполагают, что туберкулез поражает легкие человека. Мнение ошибочно, так как инфекция способна поражать разные органы. Туберкулез является распространенной патологией. Диагностика заболевания на ранних этапах затруднительна без проведения специфических анализов. По этой причине инфекция может годами находиться в организме, а при проявлении признаков диагностируют уже последние стадии патологии. Туберкулез легких не имеет хаpaктерной симптоматики, в особенности у детей. В связи с этим, признаки патологии часто путают с ОРВИ.

При правильной работе иммунной системы, организм не позволяет инфекции распространяться. Если же происходят нарушения в защитной функции, то микроорганизмы начинают активно размножаться. Туберкулез протекает в двух формах: закрытой и открытой. Пациенты с первой формой не опасны для окружающих. От представителей второй формы можно заразиться при бытовом контакте (через слюну, вещи, посуду). К признакам, которые хаpaктерны для туберкулеза относятся: повышенная утомляемость, усиленное потоотделение, лейкоцитоз, анемия.

Туберкулез легких может быть первичным и вторичным. Вторичный комплекс, как правило, проявляется по причине обострения первичных очагов. Иногда является следствием повторного инфицирования после вылечивания первичного туберкулезного комплекса. Для вторичного комплекса хаpaктерно лимфо- и бронхогенное распространение. Под первичным туберкулезным комплексом подразумевается форма туберкулеза, при которой воспалительные процессы затрагивают легочную ткань и региональные внутригрудные лимфатические узлы.

Первичный комплекс развивается после первичного заражения, чаще у детей. Обычно организм самостоятельно справляется с инфекцией без лекарственной терапии. Для первичного комплекса хаpaктерны следующие признаки заболевания: повышение температуры тела до 39-40 градусов, сильный кашель, боль в грудной клетке. Комплекс протекает аналогично пневмонии, с обширным поражением внутригрудных лимфатических узлов. Первичный комплекс чаще встречается у людей, которые находятся в непосредственном контакте с больными с открытой формой туберкулеза

Методы диагностики патологии

В медицинской пpaктике используют несколько способов диагностики туберкулеза. Анализы на туберкулез помогают определить заболевание уже на ранней стадии, когда признаков патологии еще нет, что значительно облегчает и сокращает процесс лечения. Среди основных методов выявления инфекции выделяют:

1. Реакция Манту (реакция на туберкулин, туберкулиновая проба) – накожная или внутрикожная проба, используемая для выявления специфического ответа иммунной системы на возбудитель. Тесты на туберкулез с помощью реакции Манту применяют при плановом обследовании детей, а также у взрослых при подозрении на первичный туберкулезный комплекс.
2. Флюорография – рентгенологическое исследование, которое применяют преимущественно для взрослых пациентов. С помощью рентгеновских лучей врач определяет затемнения в легких. Взрослым пациентам флюорографию нужно проходить в обязательном порядке 1 раз в год, отдельным категориям граждан чаще.
3. Мокрота на туберкулез – информативный метод диагностики, обладающий высокой достоверностью. Сдают мокроту с соблюдением определенных правил, иначе можно получить ложный результат. Для исследования нужно сдать вещество, которое отхаркивается из легких, а не слюну.
4. Посев на БК (бациллы Коха) – культурологический метод исследования. Позволяет пронаблюдать за тем, сколько микобактерий вырастет на питательных средах, а также определить их чувствительность к препаратам.
5. Моча на БК (бациллы Коха). Анализ мочи исследуют при подозрении на туберкулез органов мочепoлoвoй системы.
6. Бронхоскопия (трахеобронхоскопия) – метод предполагает непосредственный осмотр органов дыхательной системы (трахеи и бронхи) с применением специального прибора.
7. ИФА (иммуноферментный анализ) – исследование, используемое для выявления антител в крови к бактериям туберкулеза. ИФА не применяют в целях контроля эффективности лечения, так как антитела присутствуют в крови даже после излечивания.
8. ПЦР (полимеразная цепная реакция) – высокоточныйметод молекулярно-генетической диагностики, направленный на определение инфекционных и генетических патологий в острой и хронической стадии.

При плановом обследовании чаще прибегают к применению реакции Манту, в особенности у детей. Проба зачастую дает ложные результаты и не обладает высокой достоверностью. Какой именно метод подойдет вместо реакции Манту определяет врач, исходя из конкретного случая в отдельности.

Показания для ПЦР диагностики

ПЦР (полимеразная цепная реакция) является одним из самых современных методов диагностики болезней. Исследование применяют в микробиологии, иммунологии и вирусологии. Отличительной особенностью методики является универсальность. Определить инфекцию с помощью этого метода можно на самых ранних стадиях, когда признаков заболевания еще нет. В качестве исследуемого материала используется не только кровь пациента, но также моча, мокрота, слюна, посев различных оболочек. ПЦР на туберкулез делается всего несколько часов.

В большинстве случаев анализ ПЦР направляют сдать при сложности постановки верного диагноза. Проводят чаще не вместо других исследований, а в комплексе.

Такое возможно, когда имеется подозрение о первичном инфицировании, но другие методики не дают возможности точно верифицировать заболевание. К применению ПЦР прибегают, когда пациент не может лично явиться в лабораторию. Исследуемый материал (моча, мокрота, слюна, посев) могут доставить другие люди. Посев в домашних условиях берут медицинские работники.

Верифицировать туберкулез у детей предпочтительнее с помощью ПЦР. Анализ не наносит вреда ребенку и обладает высокой точностью, если сравнивать с пробой Манту. Для беременных женщин вместо рентгена лучше применять ПЦР, так он безопасен. Перед проведением экстренной операции прибегают к исследованию, так как результаты готовы в кратчайшие сроки. Пройти диагностику можно самостоятельно, если имеются сомнения в результатах пробы Манту и рентгене легких.

Анализы при туберкулезе разнообразны. Какие именно и сколько исследований понадобится для постановки верного диагноза, определяет врач. Зачастую требуется комплекс анализов. Например, при ИФА, расшифровка может дать ложные результаты, так как антитела присутствуют в крови после излечивания. Бактериологические исследования мочи, слюны и посева, реакция Манту могут быть недостоверными при несоблюдении правил подготовки. В связи с этим ПЦР один из самых точных методов диагностики.

Преимущества и недостатки ПЦР диагностики

Несмотря на универсальность и высокую информативность ПЦР, применение его повсеместно не представляется возможным. Для проведения исследования требуется дорогостоящее оборудование, и государственные больницы не всегда могут купить его. Сдавать анализ в платных клиниках не все пациенты имеют возможность. Среди преимуществ ПЦР можно отметить:

• короткий срок выполнения исследования;
• универсальность исследуемых материалов (слюна, кровь, моча и другие) ;
• не имеет противопоказания, разрешено применять в обследовании детей, в том числе вместо реакции Манту;
• позволяет определить заболеваний на самых ранних стадиях, даже без проявления признаков инфицирования;
• обладает высокой чувствительностью. Позволяет определить бактерии даже при их незначительном количестве в исследуемом материале;
• эффективно проводить при повторном появлении признаков инфицирования.

Несмотря на большой список преимуществ, метод ПЦР также, как и остальные способы диагностики туберкулеза имеет ряд недостатков. Список того, сколько минусов имеет исследование, можно объединить следующим образом:

• высокая стоимость анализа;
• мутации бактерий сводят эффективность ПЦР к нулю, так как нарушается последовательность нити ДНК;
• материал для анализа должен быть выбран верно, иначе исследование не будет иметь эффективности. К примеру, если у пациента туберкулез мочепoлoвoй системы, а для изучения вместо мочи сдана слюна, то при ПЦР возбудитель не будет обнаружен.

Метод ПЦР является исключением, а не закономерностью. Исследование относится к новым методикам, но положительно зарекомендовало себя. Огромным плюсом ПЦР является универсальность, так как в качестве материала можно использовать различные среды (слюну, кровь, мочу и прочие). При диагностике туберкулеза у детей метод служит отличным альтернативным вариантом вместо реакции Манту.

В условиях современной лабораторной диагностики обнаружить туберкулез можно различными методами на самых ранних этапах инфицирования как у детей, так и взрослых. Несмотря на то, сколько рекомендаций дают врачи для предотвращения заражения бактериями, заболеваемость растет. Также и повышается cмepтность от туберкулеза. При расшифровке обнаруживают, что патология с каждым годом протекает в более тяжелых и осложненных формах. В первую очередь вина лежит на пациентах, так как не нужно пренебрегать профилактическими визитами к врачу и обследованиями. Своевременная диагностика заболеваний облегчает лечение и снижает риск осложнений.

ПЦР диагностика туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из пoлoвых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Читать еще:  Как избавиться от храпа

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употрeбллять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

ПЦР диагностика на туберкулез

Одним их эффективных диагностических методов является метод ПЦР на туберкулез (полимеразная цепная реакция). Анализ представляет собой метод обнаружения возбудителя при помощи ДНК и РНК в организме человека. Анализ высокочастотный, поэтому позволяет выявить микроорганизмы, которые являются возбудителями болезни, даже если они находятся в малом количестве. Для этого достаточно наличия единичного клеточного элемента. Анализ проводится при помощи полимеразы, специфического фермента.

В каких случаях необходим ПЦР

Туберкулез – распространенное заболевание инфекционного происхождения, возбудитель которого – палочка Коха. К основным симптомам патологии относится кашель с выделением мокроты в течение длительного периода, кровохарканье, которое присоединяется на более поздних стадиях болезни, повышенная температура тела, постоянная слабость, потливость в ночное время, резкое похудение.

Туберкулез может поражать не только легкие, но и головной мозг, систему пищеварения, суставы, позвоночник, кожные покровы, мочепoлoвую систему. Болеют как взрослые, так и дети. Каждый год заболевают около 10 млн человек, из которых около 2 млн погибают. Патология передается воздушно-капельным путем, через органы пищеварения, быстро образует устойчивость ко многим медикаментозным средствам.

Важным моментом в лечении инфекции является вовремя обнаруженная болезнь.

Метод ПЦР для выявления туберкулеза полностью безопасный и применяется без ограничений. Проводится по направлению от фтизиатра, педиатра, терапевта или пульмонолога. В некоторых ситуациях ПЦР является единственным диагностическим методом, часто назначается:

• при беременности, т.к. во время вынашивания ребенка рентгенологическое и флюорографическое исследования противопоказаны;
• при контакте с источником инфекции;
• при аллергической реакции;
• при ВИЧ-инфекции;
• при затрудненной постановке диагноза в случае болезней легких;
• при обследовании перед проведением оперативных вмешательств;
• в детском возрасте.

Другие методы также продолжают применяться в случаях, когда нет возможности провести ПЦР, – это туберкулинодиагностика или Манту, флюорографическое исследование, рентгенография легких. Данные обследования бесплатные, в отличие от ПЦР, но имеют свои недостатки.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей – менее вредная процедypa, чем рентген, при котором ребенок получит лишнюю и не нужную дозу облучения. Тест на туберкулез может вызвать проявление аллергической реакции у ребенка. Бактериологический анализ долго исследуется, результата можно ждать только через месяц. Поэтому при возможности проведения ПЦР ребенку лучше использовать его.

Противопоказания к методу

Противопоказаний для данного вида диагностики пpaктически нет, можно использовать при простудных и других заболеваниях. Не рекомендуется проводить исследование сразу после прививки и курса противотуберкулезной терапии, т.к. остаточные микроорганизмы могут находиться некоторое время в крови и влияют на диагностику туберкулеза.

Преимущества и недостатки анализа

Диагностика туберкулеза данным методом – распространенная процедypa, она имеет ряд преимуществ:

• Высокая точность исследования, позволяющая высеять микобактерии в малых количествах.
• Выявляет заболевание на самых ранних стадиях, еще до возникновения симптоматики.
• С помощью этого метода получается с первого раза выявить возбудителя.
• Все исследование (с получением результата) занимает не более 5 часов. При этом посев необходимо ждать несколько недель. Это особенно важно перед проведением оперативных вмешательств, в случае необходимости быстрой диагностики на наличие заболевания.
• Метод эффективен при диагностике рецидива заболевания.
• Для исследования применяется жидкий биологический материал.
• Для проведения диагностики туберкулеза в легких более достоверную диагностическую информацию дает мокрота, при менингите туберкулезного происхождения исследуются участки спинного мозга.
• Кровь помогает обнаружить местный очаг инфицирования, проверить степень чувствительности возбудителя к антибактериальной терапии, а при помощи этого назначается эффективное и правильное лечение.
• Может использоваться вместо флюорографического и рентгенологического исследований, которые запрещены для проведения детям младшего возраста. При необходимости можно назначать исследование ПЦР на туберкулез вместо Манту.

• Главный – это достаточно высокая цена, поскольку для проведения исследования применяется дорогое современное оборудование. За счет этого в основном используется как метод дополнительной диагностики наряду с другими исследованиями.
• Невозможность провести ПЦР сразу после курса лечения из за остаточных бактерий.
• В некоторых случаях в результате мутирования бактерий – возбудителей заболевания – результат анализа может быть ложноположительным.

Читать еще:  Герпес при беременности. Лечение гepпeса при беременности. Чем опасен гepпeс при беременности

Виды анализа

Выбор того или иного биологического материала на исследование туберкулеза назначается индивидуально, это может быть кровь, мaзoк слюны, мокрота, моча.

Анализ крови на туберкулез назначают в случае невозможности проведения других исследований. Кроме того, он более безвреден для тех людей, которым рентгенографическое обследование способно принести вред. Для того чтобы увидеть полную картину, иногда требуется сделать несколько снимков, а это лишнее облучение организма. Кровь может исследоваться и при получении сомнительных результатов флюорографии.

Анализ ПЦР на туберкулез слюны не такой информативный, как исследование крови, потому что туберкулезная инфекция не действует на слюнные железы. В результате ответ почти всегда отрицательный.

Тем не менее ПЦР-тест слюны может выявить легочные и внелегочные формы протекания заболевания.
В случае если при воздействии реагента цветовая гамма исследуемого образца не поменялась, микобактерии туберкулеза не обнаружены. При сомнительном результате проводится ряд дополнительных обследований.

Анализ мокроты на туберкулез берется на исследование 3 раза во избежание неточного результата. При начальной стадии инфицирования мокрота будет выделяться в малом количестве, при запущенной патологии будут присутствовать кровянистые включения.

При подозрении на туберкулез костей или нервной системы данное исследование информативным не будет.

Анализ мочи помогает выявить туберкулез внелегочной формы – мочепoлoвых органов. При поражении легких данное исследование не информативно.

Сдача ПЦР мочи на туберкулез требует подготовки. Накануне процедуры нужно исключить прием лекарственных препаратов, ceкcуальные контакты. Брать материал следует в утренние часы, стараться за несколько дней до проведения процедуры не употрeбллять в пищу продукты, которые могут окрасить мочу в различные цвета.

Подготовка к процедуре

Во избежание получения ложного или не информативного результата рекомендовано придерживаться следующих правил:

• Перед ПЦР-анализом на туберкулез в течение 8 часов воздержаться от приема пищи.
• Не употрeбллять алкоголь и не курить в течение 6 часов перед процедурой.
• Перед исследованием не принимать лекарственные препараты.
• Мокроту собирать утром после чистки зубов и полоскания ротовой полости кипяченой водой.
• При небольшом количестве выделяемого экссудата накануне выпить препарат с отхаркивающим действием или провести ингаляцию. Наиболее информативная мокрота та, в которой присутствуют слизь, гной с белыми или желтоватыми вкраплениями.

При невозможности взятия мокроты на исследование применяют смыв из области бронхов, он не требует специальной подготовки. Проводится путем вливания пациенту в трахею раствора натрия хлорида, который провоцирует кашель с жидкостью. Она и используется для дальнейшего исследования.

Повлиять на точность результата могут некоторые лекарственные препараты, особенно антибиотики и гепарин. По этой причине за 3 дня до проведения процедуры следует исключить их применение.

Как производится забор крови

Процедypa проходит с использованием амплификатора, исследование состоит из 4 этапов. Для анализа берутся участки ДНК, в которых начинается процесс синтезирования молекул, нуклеотидов, полимеразанов. Образцы прогреваются до температуры 98°С для того, чтобы разрушилась первичная структура ДНК-цепочки.

Затем праймер связывается с нитью ДНК при помощи отжига и снижения температуры на несколько градусов.

После 25-30 идентичных циклов образуется некоторое число копий ДНК вирусов, по которым уже и определяется возбудитель болезни. Этот анализ может заменять Манту ребенку. Результат исследования может быть положительным в течение некоторого времени, т. к. анализ ПЦР не идентифицирует мертвые микобактерии от живых.

Расшифровка результатов

Срок проведения исследования на ПЦР при туберкулезе составляет 6-7 часов.
Может быть 2 варианта ответа:

• Обнаружено – в исследуемом материале нашли ДНК микобактерии туберкулеза. Возможность заражения – примерно 98%. При таком результате доктором проводится развернутая расшифровка анализа, которая определяет стадию протекания заболевания и ее очаговое расположение. Таких пациентов немедленно отправляют в противотуберкулезный диспансер для проведения лечения.
• Не обнаружено – возбудитель заболевания отсутствует.

Сколько стоит анализ

Анализ крови ПЦР на туберкулез стоит от 240 до 365 руб., цена зависит от города. Самый дорогостоящий анализ в Москве, в остальных регионах цена на исследование примерно одинаковая.

Преимущества и недостатки ПЦР(а) на диагностику туберкулеза

Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.

Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.

Что такое ПЦР?

Диагностирование туберкулеза способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.

ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.

Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов. Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.

Что нужно для проведения анализа?

• Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
• Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
• Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.

В чём основа метода?

Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.

Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.

При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.

Ступени диагностирования

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

1. Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут) ;
2. Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
3. Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

Обязательно ли делать ПЦР при туберкулезе?

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедypa требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

• Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
• Внешний осмотр;
• Туберкулиновая проба Манту;
• Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
• По надобности компьютерное диагностирование;
• Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности : нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

В чём ценность метода?

Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спopных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.

• Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
• Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg -снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
• Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочепoлoвoм туберкулезе;
• Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
• Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
• Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
• ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.

Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.

Видео — ранняя диагностика

В чем недостатки?

Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.

• Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
• Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.

Читать еще:  Пневмония или воспаление легких у грудничка: признаки, лечение, осложнения

Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.

Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае диссеминированного туберкулеза. Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.

Кому показан анализ?

Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спopных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?

1. Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
2. При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
3. Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
4. Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
5. Сомнительные результаты теста Манту.

Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но признаки туберкулеза человека беспокоят.

Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.

Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter. Мы исправим ошибку, а Вы получите + к карме 🙂

Методика проведения анализа крови на туберкулез ПЦР

Возбудителем туберкулеза является микобактерия под названием туберкулезная палочка или палочка Коха. Попадая в организм человека, она может длительное время себя никак не проявлять. Но со временем, как только возникнут благоприятные условия, бактерия может вызвать туберкулез легких или других органов.

Для успешной борьбы с этим заболеванием очень важно диагностировать его на ранних стадиях. Анализ крови на туберкулез методом ПЦР является самым эффективным и быстрым способом диагностики туберкулеза. На его проведение достаточно четыре часа. Он более удобен, чем другие методы, у него меньше противопоказаний и почти стопроцентная достоверность.

Что такое анализ крови методом ПЦР?

На сегодняшний день анализ ПЦР является одним из новейших методов диагностики различных заболеваний организма. Для выявления туберкулеза этот способ самый эффективный, по сравнению с другими способами, применяемыми до сих пор. Метод был открыт в 1983 году известным химиком К.Мюллисом, через десять лет получившим за него Нобелевскую премию.

В основе этого способа применяется полимеразная цепная реакция, позволяющая определить не только наличие возбудителя в крови, но и его вид. С этой целью при помощи ПЦР метода, выявляется часть ДНК возбудителя и проводится его идентификация. Даже если в крови находится несколько разных возбудителей, эта методика позволяет обнаружить их всех.

Анализ крови ПЦР на туберкулез назначают пациенту, когда есть подозрение на наличие туберкулезной палочки, но другими методами она не обнаруживается.

При желании каждый может сдать этот анализ самостоятельно, обратившись в клинику, где его проводят, например в ИНВИТРО. Это одна из крупнейших частных компаний, содержащих медицинские лаборатории во многих странах.

Эффективен ли данный метод при диагностике туберкулеза?

В настоящее время нет более точного анализа для выявления палочки Коха в организме пациента. Общий анализ крови эффективен, но позволяет получить положительный или отрицательный результат только спустя достаточно длительное время. Для этого делается посев исследуемого материала на питательную среду и лишь через несколько недель становится видно, идет ли размножение бактерии.

Метод ПЦР позволяет выявить ДНК бактерии за считанные часы, что является большим плюсом для диагностики. Кроме того, анализ позволяет точно идентифицировать бактерию, даже если ее в крови очень мало.

Противопоказания к методу

Данный метод исследования почти не имеет противопоказаний. Ввиду того, что используется кровь, состояние пациента не имеет значения. Наличие простудных заболеваний не влияет на результат анализа.

Не рекомендуется его проводить после прививки, а также после недавно проведенного лечения. Это объясняется тем, что организм еще не очистился, и остатки бактерий могут повлиять на результат.

Преимущества анализа

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

1. Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
2. Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
3. Процедypa не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
4. Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
5. Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
6. Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
7. Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Недостатки анализа крови ПЦР

Кроме преимуществ у этого метода есть ряд недостатков, которые могут быть препятствием для проведения анализа ПЦР:

1. Относительная дороговизна процедуры. Для проведения такого анализа необходимо дорогостоящее оборудование и не каждая клиника может себе это позволить. Оно есть в крупных лабораториях частных компаний. Цены там, как правило, всегда высокие.
2. Анализ дает правильный результат лишь в том случае, если материал для исследования правильно подобран. К примеру, при туберкулезе мочепoлoвoй системы, исследование крови наличие заболевания не покажет. В этом случае нужно собрать мочу или выделения из мочепoлoвых органов.
3. Метод не всегда дает точного результата у детей. Это объясняется влиянием прививок. Например, после прививки БЦЖ делать этот анализ не рекомендуется.
4. Есть вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Что это такое? Способ обладает очень высокой чувствительностью. При сборе материала должна соблюдаться повышенная стерильность. В случае если в материал попадет самое малое количество посторонних бактерий, анализ будет испорчен, результат исказится.

Несмотря на недостатки, метод достаточно широко используется. Например, в тех случаях, когда необходимо срочно определить заболевание у пациента. Его могут назначить беременным при подозрении на инфекцию, способную угрожать ребенку или матери. Иногда назначают детям перед принятием в детский сад. Но это по желанию родителей.

Подготовка к процедуре

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

1. Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
2. Процедypa проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
3. За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
4. Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
5. При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедypa переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

Как производится забор крови методом ПЦР

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий трaнcпорт.

Расшифровка результатов

Результат ПЦР может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный означает присутствие бактерии в организме. Отрицательный свидетельствует о том, что она отсутствует. Хотя не всегда положительный результат говорит о туберкулезе. Он может быть ошибочным, поэтому для подтверждения диагноза требуется пройти дополнительные диагностические тесты.

Вся остальная информация сложна для восприятия больного, и ею занимается специалист. При положительном результате врач назначает необходимое лечение.

Стоимость анализов в разных центрах

Цена процедуры может отличаться в зависимости от медицинского центра, где она проводится. Подробнее в нижерасположенной таблице.