ПЦР диагностика туберкулеза у детей и взрослых

Методика проведения анализа крови на туберкулез ПЦР

Возбудителем туберкулеза является микобактерия под названием туберкулезная палочка или палочка Коха. Попадая в организм человека, она может длительное время себя никак не проявлять. Но со временем, как только возникнут благоприятные условия, бактерия может вызвать туберкулез легких или других органов.

Для успешной борьбы с этим заболеванием очень важно диагностировать его на ранних стадиях. Анализ крови на туберкулез методом ПЦР является самым эффективным и быстрым способом диагностики туберкулеза. На его проведение достаточно четыре часа. Он более удобен, чем другие методы, у него меньше противопоказаний и почти стопроцентная достоверность.

Что такое анализ крови методом ПЦР?

На сегодняшний день анализ ПЦР является одним из новейших методов диагностики различных заболеваний организма. Для выявления туберкулеза этот способ самый эффективный, по сравнению с другими способами, применяемыми до сих пор. Метод был открыт в 1983 году известным химиком К.Мюллисом, через десять лет получившим за него Нобелевскую премию.

В основе этого способа применяется полимеразная цепная реакция, позволяющая определить не только наличие возбудителя в крови, но и его вид. С этой целью при помощи ПЦР метода, выявляется часть ДНК возбудителя и проводится его идентификация. Даже если в крови находится несколько разных возбудителей, эта методика позволяет обнаружить их всех.

Анализ крови ПЦР на туберкулез назначают пациенту, когда есть подозрение на наличие туберкулезной палочки, но другими методами она не обнаруживается.

При желании каждый может сдать этот анализ самостоятельно, обратившись в клинику, где его проводят, например в ИНВИТРО. Это одна из крупнейших частных компаний, содержащих медицинские лаборатории во многих странах.

Эффективен ли данный метод при диагностике туберкулеза?

В настоящее время нет более точного анализа для выявления палочки Коха в организме пациента. Общий анализ крови эффективен, но позволяет получить положительный или отрицательный результат только спустя достаточно длительное время. Для этого делается посев исследуемого материала на питательную среду и лишь через несколько недель становится видно, идет ли размножение бактерии.

Метод ПЦР позволяет выявить ДНК бактерии за считанные часы, что является большим плюсом для диагностики. Кроме того, анализ позволяет точно идентифицировать бактерию, даже если ее в крови очень мало.

Противопоказания к методу

Данный метод исследования почти не имеет противопоказаний. Ввиду того, что используется кровь, состояние пациента не имеет значения. Наличие простудных заболеваний не влияет на результат анализа.

Не рекомендуется его проводить после прививки, а также после недавно проведенного лечения. Это объясняется тем, что организм еще не очистился, и остатки бактерий могут повлиять на результат.

Преимущества анализа

Анализ крови ПЦР на туберкулез имеет ряд преимуществ перед другими методами исследования, такими как реакция Манту или рентген. Среди них можно выделить следующие качества:

Быстрота выполнения. По сравнению с другими анализами ПЦР делается в течение нескольких часов.
Для проведения процедуры можно использовать не только кровь, но и другие биологические выделения организма.
Процедypa не имеет противопоказаний, ее можно проводить не только взрослым, но и детям. Также подходит беременным женщинам без вреда для их здоровья.
Метод позволяет выявить заражение крови бактериями на самых первых стадиях, когда еще нет внешних признаков заболевания.
Методика позволяет выявить возбудителя при самых малых количествах бактерий в материале.
Дает хороший эффект при исследовании больного, заразившегося повторно.
Анализ можно брать независимо от того, как себя чувствует пациент. Например, реакция Манту делается, если у больного нет простудных заболеваний и повышения температуры. В данном случае таких ограничений нет.

Как видно из предоставленного списка, этот метод диагностики гораздо предпочтительнее, чем другие. Он абсолютно безвреден для пациентов, страдающих аллергическими реакциями. Его можно успешно использовать взрослым и детям. Методика позволяет сэкономить время на диагностику и быстрее начать лечение.

Метод также удобен для людей из провинции, где нет соответствующих лабораторий. Им не приходится приезжать несколько раз в клинику, достаточно одного дня, чтобы получить результат анализов и назначение лечения от врача.

Недостатки анализа крови ПЦР

Кроме преимуществ у этого метода есть ряд недостатков, которые могут быть препятствием для проведения анализа ПЦР:

Относительная дороговизна процедуры. Для проведения такого анализа необходимо дорогостоящее оборудование и не каждая клиника может себе это позволить. Оно есть в крупных лабораториях частных компаний. Цены там, как правило, всегда высокие.
Анализ дает правильный результат лишь в том случае, если материал для исследования правильно подобран. К примеру, при туберкулезе мочепoлoвoй системы, исследование крови наличие заболевания не покажет. В этом случае нужно собрать мочу или выделения из мочепoлoвых органов.
Метод не всегда дает точного результата у детей. Это объясняется влиянием прививок. Например, после прививки БЦЖ делать этот анализ не рекомендуется.
Есть вероятность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Что это такое? Способ обладает очень высокой чувствительностью. При сборе материала должна соблюдаться повышенная стерильность. В случае если в материал попадет самое малое количество посторонних бактерий, анализ будет испорчен, результат исказится.

Несмотря на недостатки, метод достаточно широко используется. Например, в тех случаях, когда необходимо срочно определить заболевание у пациента. Его могут назначить беременным при подозрении на инфекцию, способную угрожать ребенку или матери. Иногда назначают детям перед принятием в детский сад. Но это по желанию родителей.

Подготовка к процедуре

Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:

Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови. В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
Процедypa проводится утром натощак. Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедypa переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.

Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность. Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат. Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.

Как производится забор крови методом ПЦР

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий трaнcпорт.

Расшифровка результатов

Результат ПЦР может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный означает присутствие бактерии в организме. Отрицательный свидетельствует о том, что она отсутствует. Хотя не всегда положительный результат говорит о туберкулезе. Он может быть ошибочным, поэтому для подтверждения диагноза требуется пройти дополнительные диагностические тесты.

Вся остальная информация сложна для восприятия больного, и ею занимается специалист. При положительном результате врач назначает необходимое лечение.

Стоимость анализов в разных центрах

Цена процедуры может отличаться в зависимости от медицинского центра, где она проводится. Подробнее в нижерасположенной таблице.

ПЦР диагностика туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

Кровь.
Слюна.
Мокрота.
Выделения из пoлoвых органов.
Смывная жидкость бронхов.
Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

Читать еще: Препарат Нимесил от гайморита

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

Длительный контакт с больным туберкулезом.
Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
ВИЧ-инфекция.
Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употрeбллять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

Зона приемки и сортировки проб.
Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
Зона проведения реакционных проб.
Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

ПЦР диагностика на туберкулез

Одним их эффективных диагностических методов является метод ПЦР на туберкулез (полимеразная цепная реакция). Анализ представляет собой метод обнаружения возбудителя при помощи ДНК и РНК в организме человека. Анализ высокочастотный, поэтому позволяет выявить микроорганизмы, которые являются возбудителями болезни, даже если они находятся в малом количестве. Для этого достаточно наличия единичного клеточного элемента. Анализ проводится при помощи полимеразы, специфического фермента.

В каких случаях необходим ПЦР

Туберкулез – распространенное заболевание инфекционного происхождения, возбудитель которого – палочка Коха. К основным симптомам патологии относится кашель с выделением мокроты в течение длительного периода, кровохарканье, которое присоединяется на более поздних стадиях болезни, повышенная температура тела, постоянная слабость, потливость в ночное время, резкое похудение.

Туберкулез может поражать не только легкие, но и головной мозг, систему пищеварения, суставы, позвоночник, кожные покровы, мочепoлoвую систему. Болеют как взрослые, так и дети. Каждый год заболевают около 10 млн человек, из которых около 2 млн погибают. Патология передается воздушно-капельным путем, через органы пищеварения, быстро образует устойчивость ко многим медикаментозным средствам.

Важным моментом в лечении инфекции является вовремя обнаруженная болезнь.

Метод ПЦР для выявления туберкулеза полностью безопасный и применяется без ограничений. Проводится по направлению от фтизиатра, педиатра, терапевта или пульмонолога. В некоторых ситуациях ПЦР является единственным диагностическим методом, часто назначается:

при беременности, т.к. во время вынашивания ребенка рентгенологическое и флюорографическое исследования противопоказаны;
при контакте с источником инфекции;
при аллергической реакции;
при ВИЧ-инфекции;
при затрудненной постановке диагноза в случае болезней легких;
при обследовании перед проведением оперативных вмешательств;
в детском возрасте.

Другие методы также продолжают применяться в случаях, когда нет возможности провести ПЦР, – это туберкулинодиагностика или Манту, флюорографическое исследование, рентгенография легких. Данные обследования бесплатные, в отличие от ПЦР, но имеют свои недостатки.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей – менее вредная процедypa, чем рентген, при котором ребенок получит лишнюю и не нужную дозу облучения. Тест на туберкулез может вызвать проявление аллергической реакции у ребенка. Бактериологический анализ долго исследуется, результата можно ждать только через месяц. Поэтому при возможности проведения ПЦР ребенку лучше использовать его.

Противопоказания к методу

Противопоказаний для данного вида диагностики пpaктически нет, можно использовать при простудных и других заболеваниях. Не рекомендуется проводить исследование сразу после прививки и курса противотуберкулезной терапии, т.к. остаточные микроорганизмы могут находиться некоторое время в крови и влияют на диагностику туберкулеза.

Читать еще: Микоплазма пневмония у детей: симптомы, диагностика, лечение

Преимущества и недостатки анализа

Диагностика туберкулеза данным методом – распространенная процедypa, она имеет ряд преимуществ:

Высокая точность исследования, позволяющая высеять микобактерии в малых количествах.
Выявляет заболевание на самых ранних стадиях, еще до возникновения симптоматики.
С помощью этого метода получается с первого раза выявить возбудителя.
Все исследование (с получением результата) занимает не более 5 часов. При этом посев необходимо ждать несколько недель. Это особенно важно перед проведением оперативных вмешательств, в случае необходимости быстрой диагностики на наличие заболевания.
Метод эффективен при диагностике рецидива заболевания.
Для исследования применяется жидкий биологический материал.
Для проведения диагностики туберкулеза в легких более достоверную диагностическую информацию дает мокрота, при менингите туберкулезного происхождения исследуются участки спинного мозга.
Кровь помогает обнаружить местный очаг инфицирования, проверить степень чувствительности возбудителя к антибактериальной терапии, а при помощи этого назначается эффективное и правильное лечение.
Может использоваться вместо флюорографического и рентгенологического исследований, которые запрещены для проведения детям младшего возраста. При необходимости можно назначать исследование ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Главный – это достаточно высокая цена, поскольку для проведения исследования применяется дорогое современное оборудование. За счет этого в основном используется как метод дополнительной диагностики наряду с другими исследованиями.
Невозможность провести ПЦР сразу после курса лечения из за остаточных бактерий.
В некоторых случаях в результате мутирования бактерий – возбудителей заболевания – результат анализа может быть ложноположительным.

Виды анализа

Выбор того или иного биологического материала на исследование туберкулеза назначается индивидуально, это может быть кровь, мaзoк слюны, мокрота, моча.

Анализ крови на туберкулез назначают в случае невозможности проведения других исследований. Кроме того, он более безвреден для тех людей, которым рентгенографическое обследование способно принести вред. Для того чтобы увидеть полную картину, иногда требуется сделать несколько снимков, а это лишнее облучение организма. Кровь может исследоваться и при получении сомнительных результатов флюорографии.

Анализ ПЦР на туберкулез слюны не такой информативный, как исследование крови, потому что туберкулезная инфекция не действует на слюнные железы. В результате ответ почти всегда отрицательный.

Тем не менее ПЦР-тест слюны может выявить легочные и внелегочные формы протекания заболевания. В случае если при воздействии реагента цветовая гамма исследуемого образца не поменялась, микобактерии туберкулеза не обнаружены. При сомнительном результате проводится ряд дополнительных обследований.

Анализ мокроты на туберкулез берется на исследование 3 раза во избежание неточного результата. При начальной стадии инфицирования мокрота будет выделяться в малом количестве, при запущенной патологии будут присутствовать кровянистые включения.

При подозрении на туберкулез костей или нервной системы данное исследование информативным не будет.

Анализ мочи помогает выявить туберкулез внелегочной формы – мочепoлoвых органов. При поражении легких данное исследование не информативно.

Сдача ПЦР мочи на туберкулез требует подготовки. Накануне процедуры нужно исключить прием лекарственных препаратов, ceкcуальные контакты. Брать материал следует в утренние часы, стараться за несколько дней до проведения процедуры не употрeбллять в пищу продукты, которые могут окрасить мочу в различные цвета.

Подготовка к процедуре

Во избежание получения ложного или не информативного результата рекомендовано придерживаться следующих правил:

Перед ПЦР-анализом на туберкулез в течение 8 часов воздержаться от приема пищи.
Не употрeбллять алкоголь и не курить в течение 6 часов перед процедурой.
Перед исследованием не принимать лекарственные препараты.
Мокроту собирать утром после чистки зубов и полоскания ротовой полости кипяченой водой.
При небольшом количестве выделяемого экссудата накануне выпить препарат с отхаркивающим действием или провести ингаляцию. Наиболее информативная мокрота та, в которой присутствуют слизь, гной с белыми или желтоватыми вкраплениями.

При невозможности взятия мокроты на исследование применяют смыв из области бронхов, он не требует специальной подготовки. Проводится путем вливания пациенту в трахею раствора натрия хлорида, который провоцирует кашель с жидкостью. Она и используется для дальнейшего исследования.

Повлиять на точность результата могут некоторые лекарственные препараты, особенно антибиотики и гепарин. По этой причине за 3 дня до проведения процедуры следует исключить их применение.

Как производится забор крови

Процедypa проходит с использованием амплификатора, исследование состоит из 4 этапов. Для анализа берутся участки ДНК, в которых начинается процесс синтезирования молекул, нуклеотидов, полимеразанов. Образцы прогреваются до температуры 98°С для того, чтобы разрушилась первичная структура ДНК-цепочки.

Затем праймер связывается с нитью ДНК при помощи отжига и снижения температуры на несколько градусов.

После 25-30 идентичных циклов образуется некоторое число копий ДНК вирусов, по которым уже и определяется возбудитель болезни. Этот анализ может заменять Манту ребенку. Результат исследования может быть положительным в течение некоторого времени, т. к. анализ ПЦР не идентифицирует мертвые микобактерии от живых.

Расшифровка результатов

Срок проведения исследования на ПЦР при туберкулезе составляет 6-7 часов. Может быть 2 варианта ответа:

Обнаружено – в исследуемом материале нашли ДНК микобактерии туберкулеза. Возможность заражения – примерно 98%. При таком результате доктором проводится развернутая расшифровка анализа, которая определяет стадию протекания заболевания и ее очаговое расположение. Таких пациентов немедленно отправляют в противотуберкулезный диспансер для проведения лечения.
Не обнаружено – возбудитель заболевания отсутствует.

Сколько стоит анализ

Анализ крови ПЦР на туберкулез стоит от 240 до 365 руб., цена зависит от города. Самый дорогостоящий анализ в Москве, в остальных регионах цена на исследование примерно одинаковая.

ПЦР диагностика туберкулеза у детей и взрослых

Современные методы диагностики (пцр, диаскинтест, квантифероновый тест) обладают высокой эффективностью, но на пpaктике исследования не проверены. Туберкулинодиагностика была основой для выявления инфицированных и больных людей.

Способ позволил выявить много больных людей, снизить статистику заболеваемости, cмepтности.

Посев на микобактерии и микроскопия мокроты по Цилю-Нельсону позволяет достоверно диагностировать инфекцию. Проблема вызывает точное взятие мокроты прямо из пораженного бронха. На фоне туберкулезного процесса поражается значительная часть бронхиального дерева. После бактериального посева возможно проведение пробы на чувствительность возбудителя к антибиотику.

После анализа результатом диагностики фтизиатрам стало ясно, что отсутствие выделения палочки Коха не означает отсутствие инфицирования организма. Возбудитель может определяться после второго, третьего, четвертого взятия материала.

Современные диагностические методы (дст, Квантифероновый тест) выявляют микобактерии при активном течении заболевания. При наличии микобактерий внутри лимфатических узлов, при внелегочных формах заболевания тесты чаще всего отрицательны.

Своевременная диагностика составляет основу предотвращение серьезных осложнений и опасных последствий заболевания.

Современные методы

Заменой классической туберкулинодиагностике является диаскинтест (дст). Согласно последним постановлениям исследование должно заменить стандартную пробу Манту, которая позволила выявить много случаев заболеваемости, инфицированности среди населения.

Суть диаскинтеста, как и туберкулинодиагностики, предполагает подкожное введение белков возбудителей туберкулеза. В ответ на инъекцию выpaбатывается реакция гиперчувствительности со специфическими кожными изменениями: покраснение, уплотнение, образование пузырей.

Положительный результат диаскинтеста хаpaктерен для пациентов с активным течением заболевания. При инфицировании или повышенной аллергизации исследование будет отрицательным. Отрицательный эффект дст может быть результатом сильного иммунитета, но при инфицировании человека.

При сравнении с Манту диаскинтест является более универсальным и чувствительным способом диагностики туберкулеза. Отсутствие выявления инфицированности требует его применения одновременно с туберкулинодиагностикой.

Несмотря на результаты клинических испытаний дст, ученые утверждают об общей универсальности и чувствительности способа, нельзя считать исследование универсальным диагностическим решением.

Разработан тест академиками НИИ Сеченова. Отсутствие аллергии при использовании диаскинтеста объясняется подкожным введением видоспецифичных туберкулезных белков. После их введения определяется кожная реакция в виде покраснения, уплотнений.

Что такое квантифероновый тест

Квантифероновый тест оценивается после взятия крови больного. Механизм действия процедуры заключается в определении гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами после встречи с микобактериями туберкулеза. Тесты определяют туберкулезные белки, которые содержат не только бактерии человечьего и бычьего типов. Квантифероновый тест можно использовать также для диагностики микобактериозов, провоцируемых другими микобактериями, которые формируют специфические изменения на рентгенограмме. Результат теста определяется в нескольких пробирках, что повышает диагностическую чувствительность метода.

ПЦР для диагностики детского туберкулеза

Полимеразная цепная реакция – точный, но дорогостоящий метод диагностики туберкулеза. ПЦР проводится после бронхоскопии.

Рационально проведение полимеразной цепной реакции после получения отрицательных результатов. Результаты оцениваются после трехкратного посева мокроты на микобактерии туберкулеза. При самых благоприятных условиях выявление возбудителя свидетельствует об инфицированности. Назначение химиопрофилактики позволяет избежать активного туберкулезного процесса при наличии палочки Коха.

При получении штамма микроорганизма возможен посев на антибиотикочувствительность. Определение антибиотиков, способных уничтожать микроорганизмы, позволяет оценить, какими препаратами проводить лечение инфекции.

ПЦР у детей проводится при отрицательных результатах посева, но при наличии виража туберкулиновой пробы, визуализации рентгенологических признаков инфицирования, выявлении клинических симптомов текущей инфекции.

Полимеразная цепная реакция обеспечивает высокую точность (около 99%). Метод основан на амплификации нуклеиновых кислот. У микобактерий, вирусов и других микроорганизмов существуют уникальные последовательности нуклеотидов. Их диагностика позволяет выявить возбудителя заболевания.

Чувствительность пцр у детей менее низка, чем у взрослых. На пpaктике выявлены следующие особенности полимеразной цепной реакции у ребенка:

Специфичность – 80-100%;
Чувствительность – 25-80%.

Несмотря на высокую достоверность метода, получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулеза у детей. Более рационально использование способа у пациентов с иммунодефицитными состояниями. При диагностике внелегочных форм туберкулезной инфекции.

Ошибки при интерпретации определяется нарушениями при заборе и подготовке материала для исследования.

Причины отрицательного результата пцр при диагностике туберкулеза

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

Читать еще: Настойка прополиса при тонзиллите

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

У детей пцр исследование применяется чаще вследствие скрытой локализации микобактерий внутри лимфоузлов, что приводит к получению отрицательных результатов при применении других способов диагностики. При бактериальном посеве достаточно выявления около 10 микроорганизмов. Нужно учитывать, что не все отвечают за активный туберкулез легких.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

Хранить материал в стерильных пробирках;
Исключать попадание других бактерий;
При трaнcпортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.

Инновационные методы диагностики

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Современный способ лабораторной диагностики туберкулеза у детей – выявление TAB-TM

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» хаpaктеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%) ;
Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения хаpaктерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не хаpaктеризуется изменениями.

Анализы у детей на туберкулез: туберкулинодиагностика

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Классические «фтизиатрические» способы диагностики туберкулеза

Фтизиатры для диагностики туберкулеза у детей и взрослых используют следующие анализы:

Изучение анамнеза пациента (контакт с больным или носителем туберкулезной палочки). Определение социальных факторов риска помогает предположить возможное инфицирование;
Оценка туберкулиновой чувствительности (проба Манту) с PPD туберкулином в дозе 5-10 ТE. Оценка результата проводится через 48-72 часа;
Рентгенологическое исследование проводится у детей и взрослых при подозрении на туберкулез, вираже туберкулиновых проб;
Бактериологический посев является неопровержимым доказательством инфекции, спровоцированной микобактерий туберкулеза. При правильном сборе мокроты, обнаружении возбудителя в промывных водах желудка анализы на туберкулез можно считать положительными. Палочка Коха обнаруживается в гнойных абсцессах, лимфатических узлах, асцитическом выпоте, плевральном экссудате, моче, цереброспинальной жидкости;
Скорость оседания эритроцитов увеличивается при любой инфекции, в том числе туберкулезе;
ПЦР позволяет выявить специфического возбудителя, но исследование дорогостоящее;
Диаскинтест определяет легочный туберкулез, но часто дает отрицательные результаты при внелегочной локализации инфекции.

Современная диагностика туберкулеза при применении комплекса методов позволяет с высокой степенью достоверности определить микобактерию в организме. С помощью существующих способов выявляется активный процесс или инфицирование. Нужно лишь вовремя обратиться к специалистам!

Диагностика туберкулеза методом ПЦР

ПЦР диагностика туберкулеза легких — методика, доказавшая свою высокую информативность и специфичность. Она предполагает клонирование и последующую идентификацию участков ДНК, хаpaктерных только для конкретного возбудителя.

Высокая чувствительность метода означает, что даже единичные клетки микобактерий будут за 4-5 часов выявлены в мокроте, плевральной жидкости или крови пациента.

Благодаря быстрому размножению необходимой последовательности генов, полимеразная цепная реакция (пцр) имеет особенное значение в ранней диагностике туберкулеза. Она позволяет получить достоверные результаты значительно быстрее, чем традиционное бактериологическое исследование, так как в естественных условиях микобактерии туберкулеза размножаются медленно и рост культуры на питательной среде занимает до 90 дней.

ПЦР диагностика позволяет оценить ситуацию не только качественно (то есть решить, есть или нет конкретное заболевание), но и подсчитать количество возбудителей болезни в организме. Чем их больше, тем больше опасность распространения заболевания носителем инфекции. Напротив, в ходе успешного лечения концентрация бактерий в организме должна уменьшаться.

Анализ методом пцр при необходимости точной диагностики никогда не является единственным, потому что может давать и ложноположительные, и ложноотрицательные результаты. Но он применим в ходе профилактического обследования, а также подтверждает качество излечения от туберкулеза.

ПЦР диагностика у детей

Обследование детей на туберкулез требуется при поступлении в детские дошкольные учреждения и в школы, причем образовательные учреждения настаивают на регулярном обновлении данных.

Детские поликлиники обычно используют для профилактических обследований туберкулиновую пробу (Манту). То есть вводят под кожу ребенка препарат, созданный из микобактерий туберкулеза, а затем оценивают иммунный ответа.

Но у данной пробы есть ряд недостатков:

Она не устанавливает факт заболевания, но лишь подтверждает наличие или отсутствие прививочного иммунитета либо бактерионосительство;
Может давать недостоверные результаты при повышенной аллергической чувствительности организма и даже усиливать аллергию на другие вещества;
Многие родители сомневаются в точной интерпретации результатов теста.

В противовес этому пцр диагностика туберкулеза легких у детей не вызывает аллергических реакций (при заборе материала в организм ничего не вводится), результаты анализа оцениваются по объективным показателям. Сам анализ выявляет именно болезнь, а не указывает на косвенные по отношению к ней обстоятельства.

Поэтому спрос на данный метод профилактического исследования растет год от года и сдерживается только экономическими факторами. Ведь в большинстве случаев анализ делается за счет родителей пациента.

ПЦР диагностика у взрослых

Как и в случае исследования здоровья детей, пцр диагностика туберкулеза легких у взрослых может быть частью профилактического обследования и использоваться вместо данных флюорографии.

В отличие от флюорографии, анализ не создает лучевой нагрузки на организм и является более специфичным. Ведь изменения в легких, которые покажет рентген, могут быть хаpaктерны для целого ряда заболеваний, а не только для туберкулеза.

Кроме того, отрицательный результат анализа пцр дает основание утверждать, что пациент не выделяет бактерий во внешнюю среду, то есть безопасен для окружающих. Поэтому особенно важен этот тип исследования при контроле состояния здоровья людей, лечившихся от туберкулеза.

Иногда при отсутствии клинических проявлений пациент продолжает быть носителем туберкулеза, что говорит о потенциальной возможности заражения тех, с кем он контактирует, а также обещает рецидивы у самого носителя.

Золотым стандартом исследования анализ пцр является для диагностики так называемых ограниченных форм туберкулеза.

— туберкулемы;
— туберкулез внутригрудных лимфоузлов;
— очаговые инфильтраты.
к

ПЦР диагностика по крови

Кровь – не лучший материал для пцр диагностики туберкулеза легких: чувствительность анализа образцов крови, по разным данным, составляет от 17, 2 до 42, 8%.

Наибольший процент точных результатов дает анализ мокроты (до 80%), на втором месте – анализ мочи. Это объясняется тем, что далеко не каждая форма туберкулеза предполагает попадание микобактерий в кровь пациента: при туберкулезе легких специфическая ДНК в крови будет обнаружена, только если процесс распространенный и идет очень давно.

Однако сам процесс забора крови привычен для пациентов и персонала, не вызывает дискомфорта. Поэтому пцр диагностика туберкулеза по крови проводится чаще, чем анализ других биологических материалов. Особенно в случаях, когда клинических симптомов нет, а есть только потребность получить справку о состоянии здоровья.